black

基因工程原理

问答题

案例分析题λYES（酵母—大肠杆菌穿梭载体）是构建 cDNA 文库的高效载体，这种载体是λ噬菌体基因组与一个在大肠杆菌和酵母中都能复制的质粒巧妙结合而成，它兼有病毒和质粒载体的优点。cDNA 被插入载体的质粒部分，然后它能在体外被包装入病毒颗粒中，包装起来的载体感染大肠杆菌的效率比质粒本身要高得多。一旦进入了大肠杆菌，λYES中的质粒序列能够被诱导重组出λ基因组，并进行独立复制，这就可以从质粒中分离出来，以便进行进一步的遗传操作。       为了最大限度地提高克隆效率，载体用只有一个切点的限制性内切核酸酶 XhoI（5’-C十 TCGAG）进行切割，然后在 dTTP 存在的情况下，同 DNA 聚合酶一起进行温育。将一种具有平末端的双链 cDNA 同一段含由两段寡聚核苷酸组成的双链寡聚核苷酸接头连接起来，这两段寡聚核苷酸的序列是：5’—CGAGATTTACC 和5’—GGTAAATC，它们的 5’端都是磷酸。然后将载体和 cDNA混合并连接在一起。采用这种方法用 2μg的7载体和 0.1μg 的 cDNA，构建了一个有 4×10 个克隆的 cDNA 文库。

能够用XhoI从重组质粒中切出cDNA 吗？
【参考答案】

修饰的载体末端同接头分子的连接可在载体和cDNA的两个结合处重新产生XhoI的识别位点(CTCGAG)，因此，可用Xho......

(↓↓↓ 点击下方‘点击查看答案’看完整答案 ↓↓↓)

相关考题

问答题 载体和cDNA分子要经过怎样的处理才能提高产生重组 DNA分子的效率？

问答题 说明怎样处理载体和 cDNA 分子，才能把它们连接到一起。处理过的载体本身能自连吗？cDNA呢？

问答题 在此过程中，载体分子转变成重组体的频率是多少（每对核苷酸的平均分子量 660Da）？

All Rights Reserved 版权所有©考试题库网(kstiku.com)

备案号：湘ICP备14005140号-3

经营许可证号：湘B2-20140064